Abstract Background: The low sensitivity and specificity of diagnostic aids and the low isolation in cultures make it difficult to recognize early-onset bacterial sepsis in neonates. Aim: Determine the diagnostic validity of C reactive protein (CRP) in early neonatal sepsis. Method: The role of CRP in the diagnosis of early-onset neonatal sepsis was evaluated. Levels were measured at 12 and 48 hours of life in patients with suspected sepsis. When evaluating the sensitivity and specificity of the CRP, the result was used quantitatively, using a non-parametric ROC curve to estimate sensitivity and specificity, likelihood ratios and percentage of correct classification for each possible cut-off point. Results: The study included 198 patients. The sensitivity, specificity, positive predictive value, negative predictive value, positive probability index and negative probability index of CRP, were 72.2 - 82.4 - 45.2 - 93.7 - 4.1, and 0.3, respectively with area under the curve of 0.78. Conclusions: CRP is particularly useful to rule out infection. Two negative serial CRP in the absence of clinical symptoms and positive blood cultures have a high negative predictive value and a negative probability index in favor of excluding infection with high certainty and/or discontinuing antibiotic therapy.

Resumen Introducción: La baja sensibilidad y especificidad de las ayudas diagnósticas y el bajo aislamiento en los cultivos dificulta el reconocimiento de la sepsis bacteriana de inicio temprano en neonatos. Objetivo: Determinar la validez diagnóstica de la de la proteína C reactiva (PCR) en la sepsis en la sepsis neonatal temprana. Método: Se evaluó el papel de la PCR en el diagnóstico de sepsis neonatal temprana. Las concentraciones se midieron a las 12 y 48 h de vida en pacientes con sospecha de sepsis. Al evaluar la sensibilidad y especificidad de la PCR, se utilizó el resultado de manera cuantitativa y mediante una curva ROC no paramétrica se estimó sensibilidad y especificidad, razones de verosimilitud y porcentaje de clasificación correcta para cada punto de corte posible. Resultados: El estudio incluyó 198 pacientes. La sensibilidad, especificidad, valor predictor positivo (VPP), valor predictor negativo (VPN), índice de probabilidad positiva e índice de probabilidad negativa de la PCR fue de 72,2 - 82,4 - 45,2 - 93,7 - 4,1 y 0,3, respectivamente con área bajo la curva de 0,78. Conclusiones: La PCR es particularmente útil para descartar una infección. Dos PCR seriadas negativas en ausencia de expresión clínica y de hemocultivos positivos tienen un alto VPN y un índice de probabilidad negativa a favor de excluir la infección con una alta certeza y/o de descontinuar la terapia antibiótica.

A doença conhecida como "Amarelão do Meloeiro" é hoje uma das principais doenças em meloeiro no Nordeste do Brasil. Até o momento, somente o Melon yellowing-associated virus (MYaV), transmitido por moscas-brancas, foi detectado em plantas doentes e constitui-se no provável agente causador da doença. Para permitir uma diagnose inequívoca da doença, este trabalho objetivou a produção e avaliação de anti-soro policlonal contra o isolado "Bessa" de MYaV. Partículas virais foram purificadas e injetadas em coelhos para a produção do anti-soro, que mostrou ser específico sem a ocorrência de reações com extrato de plantas sadias e outros vírus que infectam o melão. Para a avaliação do anti-soro, 14 amostras de meloeiro com sintomas de amarelão oriundas de campos de produção de Pernambuco e Rio Grande do Norte foram avaliadas em DAS-Elisa. Onze amostras reagiram positivamente e verificou-se que a concentração viral maior é vista na haste e não nas folhas, sendo o tecido a ser selecionado para a realização de testes de detecção. Esse estudo demonstrou que o anti-soro policlonal produzido contra o MYaV é específico e poderá ser utilizado na detecção desse vírus em plantios comerciais de melão.

Today, the disease known as "Melon yellowing" is one of the major melon diseases in melon growing areas in the Northeast of Brazil. Up to the moment, only the Melon yellowing-associated virus (MYaV), transmitted by whiteflies, was detected in diseased plants, and it is the probable causing agent of the disease. To enable the unequivocal diagnosis of the disease, this study aimed to produce and evaluate a polyclonal antibody against the "Bessa" isolate of MYaV. Viral particles were purified and injected into rabbits for antiserum production, which was specific without any reaction with healthy plant sap. For antiserum evaluation, 14 melon samples with yellowing symptom from fields of Pernambuco and Rio Grande do Norte were evaluated by DAS-Elisa. A total of eleven samples reacted positively and the test showed that the virus concentration is higher at the stems instead of leaves, and therefore stems should be selected to be used in detection tests. This study demonstrated that the polyclonal antiserum produced against MYaV was specific and can be used to detect it in commercial melon fields.

Devido às falhas encontradas no método de inoculação de begomovírus em plantas de tomateiro, um método eficiente e confiável de inoculação de begomovírus foi desenvolvido utilizando como vetor a mosca-branca (Bemisia tabaci). A aquisição viral foi realizada em uma armadilha ('Tube-cage') feita a partir de um tubo de polipropileno contendo moscas-brancas de um ou dois dias de idade e o ápice de uma planta de tomate infectada com um begomovírus. Após 48 horas de período de aquisição, procedeu-se à inoculação utilizando-se uma armadilha em forma de anel ('Ring-cage') contendo as moscas-brancas virulíferas. A armadilha foi colocada na parte abaxial das folhas de plântulas de tomateiro. Após o período de inoculação de 48 horas, as moscas-brancas foram eliminadas e as plantas inoculadas foram incubadas por 28 dias em casa-de-vegetação. Utilizando-se este método três moscas-brancas virulíferas por planta foram suficientes para causar infecção em tomateiro susceptível cv. Viradoro. Este procedimento foi aplicado para avaliar a resistência de tomateiro linhagem 486-1 (resistente) em comparação com 'Viradoro'. Hibridização por dot-blot confirmou a susceptibilidade de 'Viradoro' e a resistência da linhagem 486-1, mostrando a utilidade deste método na seleção de plantas resistentes. Este método também permitiu a avaliação da presença do vírus nas folhas inoculadas e em folhas superiores não inoculadas, indicando que o mecanismo de resistência da linhagem 486-1 poderá estar atuando nas folhas inferiores inoculadas, não havendo translocação viral para as folhas superiores.

Due to failures of infection after mechanical inoculation of begomovirus on tomato (Lycopersicon esculentum Mill.) plants, an efficient and reliable begomovirus inoculation method was developed using the whitefly vector (Bemisia tabaci). Virus acquisition was carried out using a 'Tube-cage', made of a polypropylene tube, containing one to two day-old whiteflies and a tomato plant apex infected with a begomovirus isolate. After 48 h of acquisition access period, inoculation was done using a 'Ring-cage', containing viruliferous whiteflies, attached to the abaxial side of the leaf of young tomato plants. 48 hours after acquisition, the whiteflies were eliminated and the inoculated plants were incubated for 28 days under greenhouse conditions. Three viruliferous whiteflies per plant were enough to cause infection in susceptible tomato cv. Viradoro. This procedure was applied to test the resistance of tomato line 486-1 (resistant line) in comparison with 'Viradoro' (susceptible cultivar). Dot blot hybridization confirmed the susceptibility of 'Viradoro' and the resistance of the line 486-1, showing the efficiency of this method for screening plants for disease resistance. This method is also a useful tool in detecting the presence of virus in inoculated (lower leaves) and in non-inoculated (upper leaves) in a given plant. Using this procedure, it was observed that the resistance of the line 486-1 probably is expressed in the inoculated leaf without virus translocation to the upper leaves.

A região serrana do Espírito Santo, abrangendo os municípios de Vargem Alta, Venda Nova do Imigrante e Domingos Martins, é importante área produtora de hortaliças no Brasil. Um levantamento foi feito em outubro de 2003 visando verificar a ocorrência e a importância de viroses nas culturas de tomate e pimentão. Cento e trinta e cinco amostras foliares de tomate e pimentão apresentando sintomas semelhantes ao de infecção por vírus foram obtidas nos três municípios e analisadas por meio de sorologia e reação em plantas indicadoras. Os resultados mostraram que o Pepper yellow mosaic virus (PepYMV) é o vírus prevalente ocorrendo como surto epidêmico em diferentes cultivares de tomate e híbridos suscetíveis de pimentão. O Tospovirus Groundnut ringspot virus e o Cucumovirus, Cucumber mosaic virus apresentaram ocorrência esporádica. Não foi detectada em nenhuma amostra a presença de Potato virus Y (PVY), tobamovírus ou outros tospovírus. Apesar da ocorrência da mosca branca na região, não foram observados sintomas típicos de infecção por begomovírus nas lavouras amostradas durante este levantamento.

The highland area of the State of Espírito Santo is an important area for vegetable production comprising the counties of Vargem Alta, Venda Nova do Imigrante and Domingos Martins. A survey for viruses occurrence in the tomato and the sweetpepper crops was done in October, 2003. One hundred and thirty five leaf samples from tomato and sweetpepper showing virus-like symptoms were analyzed by serology and indicator hosts. Epidemics of Pepper Yellow mosaic virus, was observed in tomato and susceptible sweetpepper hybrids. Groundnut ring spot virus the only tospovirus species detected, and Cucumber mosaic virus was sporadically occurred. Potato virus Y, tobamoviruses and other tospoviruses were not detected in any of the analyzed leaf samples. Although high populations of the whitefly Bemisia argentifolii were present in tomato and sweetpepper no begomovirus-like symptoms were observed.

O "print-capture (PC) Polymerase chain reaction (PCR) " foi avaliado como um método inovativo de detecção de vírus de plantas. Plantas de tomate (Lycopersicon esculentum) infetadas com begomovírus e moscas-brancas virulíferas foram usadas para estudar a eficiência do método. Os passos de captura do DNA foram realizados usando filtros de náilon não carregados ou papel-filtro como suporte sólido. Fragmentos de DNA amplificados de tamanho esperado foram consistentemente obtidos por PCR de plantas infetadas cultivadas em casa de vegetação, após aplicação direta dos materiais fixados na mistura para PCR. Entretanto, para a detecção de vírus feita de uma mosca-branca e de amostras de tomateiros cultivados no campo foi necessário um tratamento a alta temperatura do material fixado antes da amplificação por PCR. Na comparação entre o filtro de náilon e papel-filtro como suporte sólido, o filtro de náilon apresentou maior eficiência de detecção. A aplicação do PC PCR reduz as chances de ocorrência de resultados falsos-positivos pela diminuição de passos de manipulação durante a preparação do DNA-alvo. Este método mantém todas as vantagens da diagnose por PCR, como a alta sensibilidade sem a necessidade de uso de reagentes radioativos.

Print-capture (PC) Polymerase chain reaction (PCR) was evaluated as a novel detection method of plant viruses. Tomato (Lycopersicon esculentum) plants infected with begomovirus (fam. Geminiviridae, gen. Begomovirus) and viruliferous whiteflies were used to study the efficiency of the method. Print-capturing steps were carried out using non-charged nylon membrane or filter paper as the solid support for DNA printings. Amplified DNA fragments of expected size were consistently obtained by PCR from infected plants grown in a greenhouse, after direct application of printed materials to the PCR mix. However, virus detection from a single whitefly and from field-grown tomato samples required a high temperature treatment of printed material prior to PCR amplification. Comparison of nylon membrane and filter paper as the solid support revealed the higher efficiency of the nylon membrane. The application of print-capture PCR reduces the chances of false-positive amplification by reducing manipulation steps during preparation of the target DNA. This method maintains all the advantages of PCR diagnosis, such as the high sensitivity and no requirement of radioactive reagents.

No estudo da interação de um begomovírus isolado de tomateiro (Lycopersicon esculentum) em Anápolis-GO, denominado GO-ANPL (taxonomicamente relacionado ao Tomato rugose mosaic virus, ToRMV) com o vetor Bemisia tabaci biótipo B, determinaram-se o período de acesso de aquisição do vírus (PAA), o período de acesso de inoculação (PAI), o período de latência (PL), a sua retenção e transmissão à progênie. Nos experimentos empregaram-se plantas de tomateiro 'Santa Clara' e cinco insetos por planta. Constatou-se um PAA mínimo de 15 min com o qual 6% dos tomateiros foram infetados. Este percentual aumentou para 65% quando o PAA foi estendido para 24 h. O PAI mínimo foi de 30 min registrando-se 18% de infecção, o qual foi elevado para 67% com 24 h de PAI. Observou-se o término do PL 16 h após o vetor adquirir o vírus. Na detecção do GO-ANPL no vetor via PCR, testes com mais de 2.500 espécimens constataram o vírus em ninfas desenvolvidas em tomateiro infetado, em adultos com diferentes PAAs, mas não em ovos de fêmeas avirulíferas ovipositados em planta infetada. Observou-se a passagem transestadial em 100% dos adultos testados que transmitiram o vírus em 33% dos casos. Evidenciou-se a transmissão à progênie pela detecção do vírus em ovos, ninfas e adultos provenientes de fêmeas virulíferas, contudo, a transmissão do vírus pelos adultos não foi observada. Os resultados obtidos indicam que a interação vírus-vetor é estabelecida desde a fase inicial do desenvolvimento do inseto e podem ser considerados relevantes para os estudos epidemiológicos dos begomovírus associados ao biótipo B de B. tabaci no país.

A begomovirus named GO-ANPL (taxonomically related to the Tomato rugose mosaic virus, ToRMV), obtained from tomato (Lycopesricon esculentum) plants in Anápolis, state of Goiás, was used to study virus/vector (Bemisia tabaci biotype B) interaction. The acquisition access period (AAP), the inoculation access period (IAP), and the latent period (LP) were determined by transferring five whiteflies per tomato seedling cv. Santa Clara. The minimum AAP was 15 min resulting in 6% infected plants, which reached 65% as the length of AAP increased to 24 h. At a minimum IAP of 30 min, 18% of plants were infected; this increased to 67% after an IAP of 24 h. The end of the LP in the vector occurred 16 h after virus acquisition. To detect the GO-ANPL in the vector by PCR, more than 2,500 specimens were tested. The virus was found in adults under different AAPs from the 1st to the 4th instar grown on infected plants. No virus was found in the eggs that were laid on infected plants by aviruliferous females. The GO-ANPL isolate was transmitted to the progeny of viruliferous females, since the virus was detected in eggs, all instars and adults. However, no virus transmission was observed from these adults. A high frequency of viral detection was observed in newly emerged adults from immature forms reared on virus-infected plants. These adults infected 33% of tomato plants in virus transmission assays. The results indicate that the interaction between begomovirus and B. tabaci biótipo B starts at early stages of insect development. This is important information for epidemiological studies of begomovirus in this country.

O gene da capa protéica (CP) do Potato virus Y estirpe "o", foi introduzido em batata cultivar Achat, via Agrobacterium tumefaciens. Sessenta e três linhas possivelmente transgênicas foram desafiadas com as estirpes brasileiras PVY-OBR e PVY-NBR. Uma linha apresentou extrema resistência às duas estirpes inoculadas, e foi denominado clone 1P. Não foram observados sintomas sistêmicos de infecção e as plantas foram negativas em Elisa. Outra linha, denominada clone 63P, mostrou algum nível de resistência. Análises por Southern blot indicaram a presença de pelo menos cinco cópias do gen CP no clone 1P e pelo menos três cópias no clone 63P. A estabilidade do gene introduzido no clone 1P foi avaliada durante três anos, após várias multiplicações in vitro. Não foram observadas mudanças no padrão do Southern blot. A estabilidade do transgene, na ausência de infecções primárias e relativo largo espectro de resistência sugerem que o clone 1P pode ser utilizado para fins comerciais.

The coat protein (CP) gene of the potato virus Y strain "o" (PVY O) was introduced into potato, cultivar Achat, via Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation. Sixty three putative transgenic lines were challenged against the Brazilian strains PVY-OBR and PVY-NBR. An extremely resistant phenotype, against the two strains, was observed in one line, denominated 1P. No symptoms or positive ELISA results were observed in 16 challenged plants from this line. Another clone, named as 63P, showed a lower level of resistance. Southern blot analysis showed five copies of the CP gene in the extremely resistant line and at least three copies in the other resistant line. The stability of the integrated transgenes in the extreme resistant line was examined during several in vitro multiplications over a period of three years, with no modification in the Southern pattern was observed. The stability of the transgenes, the absence of primary infections and the relatively broad spectrum of resistance suggest that the extremely resistant line obtained in this work can be useful for agricultural purposes.

Doenças causadas pelos vírus do gênero Tospovirus são de grande importância em culturas de hortaliças e ornamentais no Brasil. No entanto, são escassos os estudos dos insetos que transmitem estes vírus no campo, os tripes. Pouco se sabe sobre as espécies de tripes que ocorrem no Brasil e quais as responsáveis pela ampla disseminação destas doenças. Com objetivo de estudar os aspectos epidemiológicos dos vírus, diferentes populações de tripes, potenciais vetores de tospovírus, foram coletadas no DF. Quatro espécies foram identificadas, Frankliniella occidentalis Pergande, F. schultzei Trybom, Thrips palmi Karny e T. tabaci Lindeman. Este é o primeiro relato da presença de F. occidentalis e T. palmi no DF. A metodologia de criação das quatro espécies de tripes é descrita.

The disease caused by the viruses belonging to the genus Tospovirus is a serious problem in horticultural and ornamental crops in Brazil. In the field, this virus group is transmitted by the insect vector, thrips. Little is known about the thrips species occurring in Brazil, and which species are important for the dissemination of these diseases. For the study of epidemiology of this virus group, different thrips populations, which may have the capacity to be vectors of tospoviruses, were collected in the Federal District. Four species were identified: Frankliniella occidentalis Pergande, F. schultzei Trybom, Thrips palmi Karny and T. tabaci Lindeman. This is the first report of the occurrence of F. occidentalis and T. palmi in the Federal District. A methodology for the rearing of these four thrips is described in this report.